广西巴马小型猪miR-183慢病毒表达载体的构建及胚胎水平表达

摘要

目的：在于构建PLV-miR-183慢病毒载体并在293T细胞和猪胚胎细胞中进行验证. 方法：以广西巴马小型猪基因组DNA为模板,克隆miR-183前体及部分侧翼序列,利用T4连接酶将其连入pLV-CMV-MCS-EF1载体,构建PLV-miR-183慢病毒载体.在293T细胞中过表达miR-183,通过胞质注射生产转miR-183的猪胚胎. 结果：双酶切和测序结果证明成功构建了PLV-miR-183重组载体,将重组载体转染293T细胞,经胞质注射后观察到其在猪胚胎早期和囊胚期均有绿色荧光表达. 结论：本实验成功构建了猪miR-183慢病毒表达载体,在293T细胞中过表达同时生产出转miR-183的阳性胚胎,为后续研究miR-183的功能奠定基础.