产紫青霉G59的DES突变株AD-2-1新产抗肿瘤活性产物研究

摘要

为进一步拓展海洋来源药用真菌资源,课题组前期采用DMSO介导硫酸二乙酯诱变方法,以海洋来源无活性真菌产紫青霉G59为研究对象,结合抗肿瘤活性筛选模型,开展了改造次级代谢功能的实验方法研究,成功建立了操作简便的相关实验技术新方法,获得了一系列突变株,并从部分突变株发酵物中发现了其新产的活性新化合物[1-5].本文采用化学结合活性追踪分离的手段，从另外一株突变株AD-2-1 中分离得到了3 个新产新结构化合物，penicimutamides A–C（1.3），根据其NMR、ECD、计算ECD 以及X-ray 等数据鉴定为如图1所示的结构。并根据1.3上述数据的解析结果对文献报道的具有相同骨架结构的化合物aspeverin（4）[6]的绝对结构进行了校正（绝对结构由4a 校正为4）。采用MTT法测试了各化合物对人癌K562、HL-60、HeLa和BGC-823细胞的增殖抑制活性。活性测试结果显示，1和3对受试四种癌细胞具有一定的抑制作用，在100 μg/mL作用浓度下，其抑制率在6%~29%之间；而化合物2对四种受试细胞呈较强的抑制作用，其IC50分别为26、20、48和52 μM。将化合物1~3、G59及AD-2-1发酵物乙酸乙酯萃取样品配置成10 mg/ml甲醇溶液，以化合物1~3作为对照，对相同条件下同时发酵的G59和BD-3n-1发酵物乙酸乙酯萃取物在相同HPLC条件下进行指纹图谱检测。HPLC分析结果显示化合物1~3在AD-2-1的相应保留时间或附近检测到与各化合物相同紫外吸收的色谱峰，而在G59中则没有发现保留时间和紫外吸收均相一致的吸收峰，从而证明化合物1~3为突变株BD-3n-1新产、原始菌G59没有生产的次级代谢产物。本文的研究结果进一步表明通过DES诱变可成功激活真菌沉默的次级代谢基因，并可从其突变株中获得相应的新产次级代谢产物。