HDN-636靶向Hsp90的体外抗肿瘤作用的研究

摘要

Hsp90是一种分子伴侣蛋白,在恶性肿瘤处于高表达高活性状态,是目前抗肿瘤药物研发的热点靶标之一.目前的Hsp90抑制剂仍然存在毒副作用较大、来源有限、稳定性差等缺陷.因此,开发新一代Hsp90抑制剂,提高它们的成药性仍然十分必要.HDN-636是一种海洋真菌来源的结构简化的新型多硫代二酮哌嗪类化合物（顾谦群课题组提供），研究发现HDN-636不能与GA-FITC竞争性结合Hsp90，表明HDN-636不能与Hsp90 N-端结合。胰蛋白酶水解Hsp90蛋白指纹图谱研究发现HDN-636可能与Hsp90分子的C-端结合，并可能与以前发现的HDN-1作用位点不同。SPR生物芯片技术进一步确定HDN-636与Hsp90 C-端相互结合。Western Blot方法研究发现HDN-636引起HCT116细胞中Hsp90多种客户蛋白EGFR、p-EGFR、c-Abl、Stat3、p-Stat3、Raf、Akt、p-Akt、Erk的降解和活性抑制，进而导致HCT116细胞凋亡蛋白Cleaved parp、Cleaved Caspase 9、Cleaved Caspase 3表达增多，引起HCT116细胞发生凋亡。Hsp90在细胞中主要以同源二聚体形式存在，并在辅分子伴侣协助下，通过自身构象改变，而发挥分子伴侣功能。深入的作用机制研究发现，HDN-636可以抑制Hsp90 C-端蛋白的二聚化。免疫IP实验证明HDN-636能抑制辅分子伴侣CDC37与Hsp90的结合，与已有的c-端抑制剂新生霉素作用不同，并且表现出抑制Hsp90与客户蛋白如Akt、Erk结合的作用。本研究阐明了HDN-636靶向抑制Hsp90的作用位点与作用特点，明确HDN-636是一种结构更为优化的新的Hsp90抑制剂。进一步将评价HDN-636体内抗肿瘤作用，为今后HDN-636开发为靶向Hsp90的抗肿瘤药物奠定基础。