抑制CYP4A11基因表达的siRNA优选及对血管收缩相关因子的影响

摘要

在过去十年中，高血压、动脉粥样硬化性心血管病等病患病率越来越高，流行病学研究发现人的CYP4A11基因多态性与多种心血管病存在显著相关性。为考察人细胞中的代谢细胞色素P4504A11(CYP4A11)基因表达受抑制之后是否会影响血管相关收缩因子的表达,通过在线设计多个抑制细胞中代谢酶CYP4A11基因表达的siRNA并通过Blasting验证,选择效果好的三对siRNA合成并转染至EA.hy926细胞株,通过荧光染色和定量多聚酶链反应(quantitative polumerase chain reaction,qPCR)初步检测,再采用表达量相对更高的MG63细胞系通过qPCR与蛋白质印迹法(Western blotting,Western-blot)进行验证,检测发现25nmol/L的siRNA2抑制效果最好.使用25nmol/L siRNA2抑制CYP4A11在EA.hy926细胞株中的表达后,通过qPCR与Western-blot发现促血管收缩相关因子内皮素1受体(Endothelin1receptor,ET1R)、血管紧张素1型受体(Angiotensin type1receptor,AT1R)表达下调(P<0.05),而内皮型一氧化氮合酶(Endothelial nitric oxide synthase,eNOS)表达显著上调(P<0.001).因此,siRNA2能通过显著抑制在EA.hy926细胞中CYP4A11的表达,并因此显著调节血管紧张的相关指标,有促血管松弛作用的趋势.