基于氟亲和作用力芯片与MALDI-TOF质谱技术测定酶活性

摘要

质谱技术由于具有高通量和免标记的优势,被广泛应用于酶活性分析测定.为简化样品前处理过程,在前期工作基础上,设计了氟亲和作用力芯片,结合MALDI-TOF质谱技术测定酶活性.该工作以天冬氨酸蛋白水解酶Caspase-3为模型,将其多肽底物与“氟标签分子”连接并通过氟-氟相互作用组装于氟修饰玻片表面,制备出用于酶活性检测的芯片.氟-氟相互作用不仅保证了底物的高效组装,同时可有效减少非特异性吸附,提高分析灵敏度.在目标酶的作用下,底物被剪切产生质量位移,则酶活性可通过其质谱图酶切产物直观反应出来.该芯片也可应用到其他酶以探究它们在更多过程中的作用机制.