感染高粱花叶病毒甘蔗叶片cDNA文库构建及评价

摘要

为了研究甘蔗花叶病与甘蔗寄主致病的互作分子机制,本文利用SMART技术成功构建感染高粱花叶病毒甘蔗叶片的cDNA文库,用于后续酵母双杂交互作蛋白筛选试验.本文采用Omega公司Plant RNA Kit提取感染高粱花叶病毒甘蔗叶片总RNA,经过Oligotex纯化获得mRNA,将其反转录成cDNA第一链,再在DNA聚合酶作用下,通过长距离PCR扩增双链cDNA.经SfiI酶切并去除短片段后,连接到pGADT7-SfiI载体上成功获得初级cDNA文库,最后以初级文库100万克隆为基数扩增,得到扩增文库并提取质粒.经检测构建的文库容量为1.6×106CFU,文库滴度2.2×106CFU/mL,文库cDNA插入片段长度主要分布在700-2000bp之间,文库重组率约为96％.以上结果表明该文库质量较好,为筛选分离抗病功能基因及开展寄主与病毒互作的研究奠定了基础.