核盘菌菌株SZ-150弱毒特性与致病因子相关性初步研究

摘要

本文发现了一株核盘菌形态异常的菌株SZ-150,其对油菜及其他寄主表现出弱毒性状,随之对其所含的真菌病毒进行了详细的研究.研究结果表明菌株SZ-150中含有三种真菌病毒,但是与其弱毒特性相关的弱毒病毒是SsHV1及其卫星RNA,明确了卫星RNA是菌株毒力衰退的重要因子.但是,菌株SZ-150的毒力衰退机理还需要进一步的探究.本研究以含有SsRV1、SsHV1及其卫星RNA的菌株SZ150(无致病力),含有SsRV1、SsHV1的菌株R6(中等致病力),含有SsRV1的菌株R59(强致病力)及不含有SsRV1、SsHV1及其卫星RNA的菌株A6为材料,分析不同菌株之间生长速度、菌落形态及菌丝尖端形态,草酸分泌量及侵染垫形成的情况,此外还观察细胞内部结构,现获得如下结果:①对四个菌株间生长速度、菌落形态及菌丝尖端形态的进行比较,发现菌株A6、R59、R6尖端分枝正常,而菌株SZ-150菌丝尖端分枝多且稠密、菌丝呈现明显的色素积累,菌珠SZ-150的生长速度显著减慢.②通过透射电镜观察细胞内部结构，发现菌株S2-150相对于菌株A6、R59、R6，细胞内部结构如线粒体等受到严重破坏，细胞壁明显加厚，细胞壁周围有类似黑色素颗粒状的物质分泌。③通过扫描电镜观察菌株侵染寄主植物油菜叶片时的侵染过程，发现菌株A6、R59、R6在侵染寄主的早期(8h)都形成了大量的侵染垫；而菌株S2-150直至接种叶片48h后，都没有观察到明显的侵染垫，仅可以看见一些菌丝在寄主表面蔓延。④定性测定产酸量（主要为草酸）表明，菌株A6、R59、R6可以产生大量的酸性物质，菌株S2-150虽然也可以产生酸性物质，但是产酸能力较A6、R59、R6明显减弱；利用HPLC对S2-150、A6、R59、R6在PDB中的分泌草酸能力进行动态分析，结果表明A6、R59、觔在接种PDB后，在第4和第5天的时候产草酸量达到了最大值，随后产生草酸能力开始逐渐下降，S2-150虽然也能产生草酸，但是在前期比A6、R59、R6产草酸的能力较弱，在第6天的时候达到最大值，在第7天产草酸能力开始下降，即菌株S2-150的草酸大量产生时间相对滞后，且产生草酸的持续时间相对较短。从所观察到的菌株S2-150这些异常情况可以初步解释其致病力丧失的原因：由于病毒SsHVl及其卫星RNA的存在，影响了菌株S2-150的生长、产生草酸的量、侵染垫的形成及细胞内部细胞器的完整性，从而最终影响到了菌株S2-150的致病力。目前菌株S2-150的致病衰退分子机理正在进一步的研究中。