胸膜肺炎放线杆菌ureC-/apxⅢ+突变株构建及生物学特性研究

摘要

胸膜肺炎放线杆菌是引起猪传染性胸膜肺炎(APP)的呼吸道病原菌,其中尿素酶是其主要的毒力因子之一.为构建APP尿素酶基因突变弱毒菌株,在ureC基因中缺失一段基因片段,并插入具有免疫原性的apxⅢ基因片段,利用sacB基因负向筛选系统构建无抗生素抗性基因标记并表达ApxⅢ的APP ureC-/apxⅢ+突变菌株.该突变菌株特性鉴定结果显示,溶血活性和尿素酶活性完全丧失,可正常增殖和分泌ApxⅡ毒素,同时可表达插入的外源基因ApxⅢ,连续传20代后基因组中插入的外源基因可稳定遗传,对每组5只小鼠腹腔攻毒结果显示突变菌株毒力较母源菌株降低10倍.该突变菌株的构建为研制具有交叉保护活性的APP弱毒活疫苗奠定了基础.