猪蓝耳病病毒感染猪肺脏巨噬细胞生物学性状分析

摘要

目的:通过对猪肺泡巨噬细胞(PAM)、猪肺血管巨噬细胞(PIM)、猪肺间质巨噬细胞(IM)三种细胞生物学性状相关指标的分析,鉴定不同猪肺脏巨噬细胞的功能及意义.rn 方法:通过支气管肺泡灌洗获取PAM,右心室插管经心脏行肺血管原位灌注的方法分离得到PIM、肺组织机械处理结合酶消化法(胶原酶IA)分离IM.显微镜下观察三种细胞的形态上的不同;不同剂量TLR4配体(脂多糖,LPS)和TLR3配体(聚肌胞,polyl:C)分别作用PAM和IM细胞,检测猪肺脏不同部位巨噬细胞活力和NO功能变化;以不同感染复数(MOI=1、3、7)的PRRSV野毒(SJ-F10)和疫苗毒(TJM-F92)感染PAM和IM,检测NO产生能力和细胞活力水平.荧光定量PCR技术检测野毒PRRSV感染PAM、PIM、IM病毒表达量.rn 结果:三种巨噬细胞形态有明显的不同,PAM较大,PIM和IM较小,PRRSV感染PAM,在PAM中大量增殖,随病毒量的增加,PAM发生明显的聚集现象,而PIM.IM无显著变化;以lpg/ml,10 pg/ml,100 pg/ml,1 ng/ml,10ng/ml TLR4配体(LPS)或1 μg/ml,Sμg/ml,25μg/ml TLR3配体(polyI:C)刺激PAM和IM,产生逐渐NO增加,呈剂量依赖关系;超过100ng/ml LPS或125μg/ml polyI:C,NO水平迅速下降,但细胞活力没有明显变化.以不同感染复数的PRRSV野毒(SJ-F10)和疫苗毒(TJM-F92)感染PAM和IM,疫苗毒刺激PAM、IM细胞NO产生病毒浓度增加而增多,并明显高于PRRSV野毒;而且TJM-F92株较野毒株,对PAM、IM细胞活力也有明显增强作用.荧光定量PCR技术检测野毒PRRSV感染PAM、PIM、IM病毒表达量结果表明PRRSV在PAM中大量增殖,而在IM和PJM中增殖较少.rn 结论:PAM、PIM、IM在形态和功能上存在异质性,PAM是PRRSV在体内感染的主要靶细胞.