表达PCV2 Cap蛋白的腺病毒载体构建及优化

摘要

猪圆环病毒2型(PCV2)是危害全球规模化养猪业的重要病原之一, 疫苗接种是预防PCV2相关性疾病(PCVAD)的重要措施.PCV2有两个主要的开放阅读框ORF1和ORF2,分别编码复制相关蛋白(Rep蛋白)和核衣壳蛋白(Cap蛋白),其中Cap蛋白含有病毒主要抗原表位,是研究PCV2基因工程苗的主要候选目的基因.本研究拟构建和优化表达PCV2 Cap蛋白的腺病毒载体,为进一步研究PCV2重组腺病毒基因工程疫苗的奠定基础.WPRE是一个强大的病毒转录后调控元件，可以提高基因表达的效率，通过参与RNA polyA修饰、RNA出核和RNA翻译等过程对目的基因表达进行调控。本研究将intronA和WPRE分别插入Cap基因上下游，成功构建了优化型表达PCV2 Cap蛋白的腺病毒载体，在大肠杆菌BJ5183重组后，PacⅠ酶切后转染HEK293细胞，连续传代5代，经RT-PCR和WesternBlot鉴定，成功构建了4种重组腺病毒:rAd-Cap,rAd-intron A-Cap,rAd-Cap-WPRE,rAd-intron A-Cap-WPRE，且TCID50均在10-9/100 μL以上。