山东PCV2全基因序列分析及含CpG的PCV2ORF2的真核表达载体的构建和表达

摘要

猪圆环病毒2型(Porcine cricovirus type 2，PCV2)为无囊膜的单股环状负链DNA病毒，属圆环病毒科，与断奶仔猪多系统衰竭综合征(post weaning multisystemicwasting syndrome，PMWS)密切相关，1991年在加拿大首次暴发，随后世界许多国家和地区流行，给养猪业造成严重的经济损失。 为了在分子水平上揭示山东PCV2流行的来源及遗传学背景，并为山东省PCV2的防治提供一种安全有效的手段，本研究在课题组对山东省PCV2血清学调查的基础上，根据GenBank中发表的猪圆环病毒2型(PCV2)全基因序列(Gene bank accession number：40985(20))，设计一对特异性引物，用PCR方法直接从在山东地区采集的血清学检测为阳性的病料中分别扩增出两株PCV2毒株的全基因组，进行了序列测定，分别命名为SD-1株(DQ346683)和SD-2株(DQ478947)，结果表明，SD-1株全基因组核苷酸长度为1767bp，SD-2株全基因组核苷酸长度为1768 bp。应用DNAstar分析表明，本实验得到的两株PCV2的全基因序列与世界上其它地区的。PCV2分离株的全基因序列同源性高达93.9％-99.7％，ORF1基因序列的同源性为96.9％-99.7％，ORF2基因序列的同源性为91.2％-99.9％。 以PCV2 SD1株(DQ346683)的DNA为PCR模板，扩增得到编码PCV2结构蛋白的ORF2基因，在课题组对适合猪的CpG-ODN筛选研究的基础上，将ORF2基因和一段含有18个CpG基序的150bp长的CpG序列分别插入了真核表达载体pVAX1的多克隆位点和骨架结构中，得到了重组真核表达载体pVAX1-ORF2-CpG，并在哺乳动物细胞中对ORF2基因进行了体外表达试验，用间接免疫荧光方法对表达蛋白的免疫原性进行了初步检测。结果表明，本研究构建的含CpG的PCV20RF2的真核表达载体pVAX1-ORF2-CpG在哺乳动物细胞中得到成功表达。

目录

文摘

英文文摘

论文说明:英文缩写词表

声明

前言

文献综述

一、圆环病毒文献综述

二、CpG文献综述

第二部分 研究报告

试验一山东PMWS病猪PCV2全基因组序列分析

1．材料与方法

2．结果

3．讨论

试验二含CpG基序的PCV2 ORF2真核表达载体的构建及真核表达

1．材料与方法

2.结果

3．讨论

结论

参考文献

发表文章

附录溶液的配制

致谢