PHEV诱导神经细胞凋亡机制的研究

摘要

目的:猪血凝性脑脊髓炎病毒(PHEV)属于β-冠状病毒属的成员,具有典型的嗜神经性,病毒感染后主要沿外周神经向中枢神经传递,并对神经元造成严重损伤.大量研究表明,脑神经元损伤与凋亡密切相关.PHEV感染是否可诱导宿主神经细胞凋亡还未见报道.因此,本研究对PHEV诱导神经元凋亡现象进行检测,进而对其诱导细胞凋亡的机制进行初步的探讨.rn 方法:以小鼠神经瘤母细胞(N2a细胞)作为脑神经元的细胞模型，将PHEV感染细胞后，观察CPE特点及细胞核的形态变化，应用Annexin V-FITC/PI法、DNA ladder等多种检测凋亡现象的方法进行检测分析。进而应用紫外分光光度法、免疫印迹技术、Real time PCR等方法对PHEV诱导N2a细胞凋亡的信号转导通路进行了初步的探讨。rn 结果:通过PHEV感染N2a细胞凋亡现象的检测发现PHEV能诱导宿主细胞凋亡，并且PHEV在感染N2a细胞的过程中促进了死亡受体蛋白Fas的表达，以及通过调节Bcl-2和Bax的表达促进细胞色素C的释放，并同时激活了caspase-3,-8和-9,表明PHEV诱导N2a细胞凋亡的过程中同时经过死亡受体途径和线粒体途径。其次，将经紫外线灭活的PHEV接种N2a细胞后，进行细胞凋亡检测;发现灭活的PHEV并不能诱导宿主细胞凋亡，表明PHEV诱导细胞凋亡的过程中依赖于病毒的复制增殖。最后，本研究应用caspase抑制剂有效抑制细胞凋亡后接种PHEV与正常接毒组进行比较，发现二者的病毒滴度差异不显著，表明PHEV增殖不依赖于凋亡的发生。rn 结论:本研究证明了PHEV能诱导细胞凋亡并初步探讨了PHEV诱导细胞凋亡过程中的信号通路。该研究结果为深入解析PHEV的分子致病机制提供了重要的研究基础。