表达ORFV F1L基因的重组山羊痘病毒的构建及初步鉴定

摘要

为了研制安全有效的预防羊口疮的重组山羊痘病毒活载体疫苗。本研究通过PCR技术从ORFV-shz分离株基因组中扩增目的基因F1L，将获得的基因片段与载体pUC-TK12连接，同时酶切插入LacZ筛选报告基因和Pb56双向启动子，构建重组转移载体pUC-TK12-LacZ-F1L，将其转染至己感染山羊痘病毒疫苗株的BHK-21细胞，进行同源重组。通过蚀斑筛选挑取蓝色蚀斑，收获重组山羊痘病毒并进行PCR初步鉴定。结果显示获得了全长1023bp的F1L基因，并构建了重组转移载体，转染BHK-21细胞后进行同源重组，成功获得了携带F1L基因的重组山羊痘病毒。本研究成功获得了含有羊传染性脓疽病毒F1L基因的重组山羊痘病毒疫苗候选株rGPV-F1L，为羊传染性脓疱病基因工程活载体疫苗的研制奠定基础。