绵羊肺腺瘤病肺组织基因组BAC文库的构建及鉴定

摘要

绵羊肺腺瘤病(SPA)是由绵羊肺腺瘤病病毒(JSRV)引起的一种传染性肺脏肿瘤性疾病.此病毒属β-反转录病毒,其基因组全长约7.4kb.JSRV的致瘤与其它反转录病毒相似,其病毒粒子表面的囊膜蛋白与靶细胞表面的特异性的受体相互作用而侵入靶细胞.在靶细胞内,以病毒RNA为模板利用反转录酶反转录为cDNA,新合成的双链DNA进入到细胞核内,并在整合酶的催化作用下,将病毒DNA整合到宿主细胞基因组DNA中.本研究旨在通过构建绵羊肺腺瘤病肺组织基因组BAC文库并筛选得到JSRV病毒全基因组，再利用分子克隆的方法得到JSRV病毒粒子。构建了BAC文库的混合池(超级池和二级池)并分别提取行池、列池、板池的DNA。根据JSRV的全基因组序列，利用PrimerPrimer 5.0软件分别在gag,pro,pol基因区域设计1对引物，同时在LTR-gag ,env-LTR区域设计套式PCR引物，用于筛选文库。先用pro特异性引物对500个超级池的DNA进行PCR扩增，找出含有阳性克隆的超级池。然后再用gag,pol基因特异性引物对阳性的超级池的DNA进行二次PCR鉴定，共获得47个阳性超级池。之后，再对超级池所在的行、列、板三个方向对8个行池、12个列池和10个板池的DNA利用LTR-gag,env-LTR区域套式PCR引物进行PCR扩增。己得到3个阳性克隆，但都为内源性病毒。目前还在进行筛选工作。