乳酸菌代谢产物乳酸对LPS诱导的MIMVEC细胞信号通路NF-κB的调控作用

摘要

旨在探讨乳酸抑制脂多糖(LPS)致大鼠肠黏膜微血管内皮细胞(MIMVEC)中核因子κB(NF-κB)P65表达的作用.原代培养MIMVEC,分为空白对照组、LPS阳性对照组、乳酸高浓度组、中浓度组和低浓度组,高、中、低浓度的乳酸预处理细胞3h后,LPS处理细胞4h,用ELISA方法检测TNF-α和IL-6的表达量.用荧光定量PCR方法对NF-κB mRNA进行定量检测;用Western Blotting的方法检测NF-κB p65蛋白表达的变化.荧光定量PCR结果显示,LPS处理细胞4h的乳酸高、中、低浓度组中NF-κB mRNA的表达量是空白组对照的1.51倍、2.62倍、3.00倍,而LPS组中NF-κB mRNA的表达量是空白对照组的7.36倍;Western Blotting的结果显示,各组蛋白提取物中均存在分子量约为65ku的、与兔抗NF-κB P65多克隆抗体发生免疫阳性反应的蛋白条带,且乳酸高浓度组细胞中NF-κB P65的表达与空白对照组相比差异不显著(P＞005);中浓度组和低浓度组细胞中NF-κB P65的表达与空白对照组相比差异显著(P＜0.05).LPS组NF-κB P65的表达与其他各组相比均差异极显著(p＜0.01).结果提示,乳酸对LPS所致的MIMVEC细胞NF-κB激活具有明显的抑制作用,下调了转录因子NF-κB的转录活性,进而抑制了炎性因子TNF-α和IL-6的表达.