猪繁殖与呼吸综合征病毒5非翻译区——突出茎环是病毒复制必需的顺式作用元件

摘要

猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)基因组5'非翻译区(UTR)对病毒复制转录等生物合成过程至关重要,但其发挥作用的机制尚不清楚.本实验室在北美型(pAPRRS)与欧洲型PRRSV(pSHE)感染性克隆骨架上,分别在各自的5' UTR与ORF1之间插入"at"形成NdeⅠ位点,由此产生的两个突变全长克隆pTLNd4和pSHEnde,经过转染和传代证明突变位点的引入不影响两者的感染性.在此基础上,将两型5'UTR进行互换,所构建的突变体克隆pTLV8和pSHSP5中,前者具有感染性,后者则是致死性突变体.在对pSHSP5以及pTLV8的二级结构预测中发现,嵌合突变体pTLV8的5'端虽然与亲本pAPRRS的二级结构差异很大,但保留了TRS所在的最突出的茎环结构,且TRS与ORF1的AUG均位于最顶端的loop上.而pSHSP5的此茎环结构则遭到了破坏.对另一突变体,pPa2(在5'UTR和ORF1之间插入"aatt"形成Pac Ⅰ的酶切位点)的研究中也发现只要突变破坏了顶端loop结构.对病毒就是致死性的.这也佐证了此茎环结构的重要性.综上所述,本研究证明了TRS所在的顶端loop结构是调控病毒复制转录过程的关键顺式作用元件之一.任何对其结构破坏的突变都会成为致死性突变.