PRRS病毒核衣壳蛋白在大肠杆菌中的高效表达

摘要

用表达非融合蛋白的原核表达载体pBV220,通过PCR技术的引物设计对PRRS病毒BJ-4株核衣壳蛋白(N)基因起始密码子上游进行了改造和修饰,在其上游加入了EcoR I酶切位点,将PRRS病毒N基因插入载体pBV220P<,L>P<,R>启动子和S-D序列下游合适距离的位置,成功地构建了含有PRRS病毒N基因的原核重组表达载体pBV-N.pBV-N转化大肠杆菌DH5α,经温度诱导后菌体裂解物经SDS-PAGE分析发现,在约15KD处出现一条诱导前后的pBV220载体对照和诱导前的pBV-N中均缺少的特异性的蛋白条带,分子量大小与PRRS病毒N蛋白相符,并随着诱导时间的延长而成动态变化,在诱导后4小时达到高峰,薄层扫描结果显示重组N蛋白表达量最多可占菌体总蛋白的27.4﹪.Western-Blot检测结果表明,此15KD的蛋白带可为PRRS病毒N蛋白的单克隆抗体所识别,在大肠杆菌中表达的非融合性重组N蛋白具有良好的抗原性.