非典型犬瘟热病毒核衣壳蛋白基因序列分析及其在大肠杆菌中的表达

摘要

为分析当地非典型犬瘟热病毒(cDV)核衣壳蛋白(N)基因的序列特征及其表达产物的抗原性，根据已发表cDv的N基因序列设计引物，用RT-PcR方法从引起非典型症状的CDV细胞培养物中扩增N基因，进行克隆和序列分析，结果表明：该非典型CDV的N基因与已发表的12个CDV强毒株的核苷酸序列和氨基酸序列同源性分别在96．6％～99．2％和97．9％～99．4％之间，与已发表的4个CDV疫苗弱毒株的同源性分别在93．2％～93．6％和96．4％～97．5％之间;在N基因系统发育进化树上，非典型CDV与12个强毒株处在同一亚群，而且与9个中国分离毒株的亲缘关系近于3个国外毒株。N基因在大肠杆菌中表达的重组N蛋白的分子量为62 ku，主要以包涵体的形式存在;用western blot分析，重组N蛋白可与CDV阳性血清发生特异性反应;以纯化的重组N蛋白为抗原建立的CDV抗体间接EUSA检测方法具有良好的特异性。