小鼠4-细胞胚OPS法冷冻保存技术的研究

摘要

本实验在37℃条件下,利用玻璃化冷冻溶液EFS30、EFS40、EDFS30或EDFS40,对小鼠4-细胞胚进行玻璃化冷冻保存,解冻后培养72h时的囊胚发育率为其体外发育能力的考核指标,同时对解冻后培养1~3h的胚胎进行移植以判断其体内发育潜力,以比较OPS一步法和两步法中,4种冷冻液对胚胎的冷冻保存效果.在OPS两步法中,胚胎首先移入预处理液(10﹪EG或10﹪EG+10﹪DMSO)中平衡3Os,再移入玻璃化溶液中洗涤后吸入OPS管中,经35x、30或25s后直接投入液氮中冷冻保存,一步法则未经预处理液处理.结果表明,小鼠胚胎OPS一步法冷冻后囊胚发育率最高为87.7﹪,与对照组差异不显著(p>0.05),两步法冷冻后囊胚发育率最高为88.6﹪,利用此OPS最佳冷冻组获得的143枚胚胎移植给12只假妊娠50~60h的受体母鼠,结果有4只妊娠(移植胚胎数为40),产仔17只,妊娠产仔率为42.5﹪(17/40),与对照组59.4﹪(19/32)差异不显著(p>0.05).