一种快速提取腥黑穗菌属冬孢子优质DNA的新方法

摘要

通过比较测试确定了一种有效去除腥黑穗菌坚硬的冬孢子壁,大量提取适合于PCR反应的DNA新方法,即用加热碱液浸泡-研磨法有效地降解和去除坚硬的冬孢子外壁.通过冬孢子壁裂解液浓度和浸泡时间测试,确定3mol/L NaOH溶液65℃浸泡0.5h可以达到95％以上的破壁效果.腥黑穗菌冬孢子破壁后经CTAB法提取DNA,再利用微滤柱过滤法排除冬孢子DNA制备液中所含的PCR反应抑制物.此法解决了腥黑穗菌厚壁冬孢子核酸样品制备效率低的难题,有效地避免了PCR检测的假阴性反应.