目的:建立HBV体外感染HepG2细胞的实验方法。rn 方法:培养HepG2细胞传至6孔板中,以3毫升含10%新生牛血清的DMEM培养基,在37℃,5%CO2条件下的孵箱中培养。24h后进行HBV体外感染HepG2的实验.感染组用HBV阳性血清(HBV DNA 3×109copy/ml,用DMEM按1:3稀释,滤过后使用)0.5m1,阴性对照组用HBV阴性血清.实验开始后HepG2细胞继续孵育24h,而后用0.01M PBS彻底清洗各细胞培养孔涤完毕后各孔加入舍2%新生牛血清的DMEM培养液。PBS洗后每隔12h收集各孔细胞培养上清一次.ELISA检测细胞培养上清中的HBsAg.PCR检测细胞培养上清和HepG2细胞中的HBVDNA,用荧光定量PCR检测感染组细胞上清中HBV DNA的含量.rn 结果:HBV阳性血清感染组,在PBS洗后12h的细胞培养上清中ELISA可检测到HBsAg阳性持续到84h.HBV阳性血清感染组细胞培养上清和HcpG2细胞中HBV DNA PCR阳性,阴性对照组和空白对照组HBV DNA PCR阴性.荧光定量PCR检测,感染组洗后的HBV定量为阴性,而在PBS洗后36小时、84小时的上清中HBV的量达到5×105和3×106(copy/ml).rn 结论:HBV阳性血清进行HBV感染体外培养的HepG2细胞是可行的.
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