猪伪狂犬病病毒LY株gD基因的克隆与核酸疫苗研究

摘要

将PRV的免疫糖蛋白基因--gD基因和RRSVLX-1株的E基因基因分别克隆到核酸疫苗载体pIRESneo、pEGFP-C1的多克隆位点上,成功地构建了含有相应目的基因的重组核酸疫苗质粒pIgD、pFgD、pIE和双基因共表达二联核酸疫苗质粒pID-E.将构建的核酸疫苗质粒,通过脂质体分别转染到BHK-21细胞中,经ELISA检测所有目的蛋白均得到表达,表达产物也均具有一定的反应原性.小鼠免疫试验证实该核酸疫苗质粒具有很好的免疫原性,能诱导小鼠产生特异性抗体,第三次免疫后,抗体阳转率为100﹪,pIgD抗体效价均不低于1:160,最高可达1:640.pIE与pIgD的联合应用时,不影响各自特异性抗体的产生.首次构建的含有PRRSV囊膜糖蛋白E基因和PRV糖蛋白gD基因的双基因共表达核酸疫苗质粒pID-E,脂质体转染BHK-21细胞后,PRRSV和PRV的囊膜糖蛋白均获得了瞬时表达,小鼠免疫试验表明E和gD两种糖蛋白基因能在小鼠体内共表达,能诱导免疫小鼠产生中和PRRSV和PRV的抗体.上述研究为进一步研究PRRSVE、N蛋白及PRVgD蛋白的免疫生物学特性,进而为研究有效的诊断抗原和开展PRRSV与PRV相关基因在哺乳动物细胞中的联合表达及基因免疫奠定基础.