环磷酰胺联合地塞米松建立小鼠肺癌骨转移的动物模型

摘要

目的：应用瘤细胞悬液移植法和胫骨内注射法将人肺腺癌A549细胞接种于具有正常免疫功能的小鼠体内,建立小鼠肺癌骨转移模型,观察成瘤时间、肿瘤进行性生长情况和其他实质性器官转移情况.为转移瘤的研究和治疗提供科学依据.rn 方法：6周龄雌性C57小鼠40只,随机分为A、B、C、D组(A组为阴性对照组,B组为低剂量免疫抑制组,C组为中等剂量免疫抑制组,D组为高剂量免疫抑制组).B、C、D组在实验的第1天分别腹腔注射环磷酰胺(CY)100、150、200mg/kg,在次日分别注射地塞米松钠50、100、150mg/Kg,连续注射3天.A组小鼠腹腔注射等量生理盐水.第5天,取对数生长期的人肺腺癌A549细胞,注射1.0×109L-1细胞悬液于小鼠右后肢胫骨平台下.A组的10只小鼠注射相应剂量的PBS.造模后第20天时进行影像学测定,第21天取材,测定肿瘤体积,通过影像技术评估骨质缺损程度.显微CT测定骨矿物质含量(BMC)和骨密度(BMD),HE染色观察肿瘤形态,抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色并计数破骨细胞.rn 结果：肉眼观察肿瘤生长明显,B组1只成瘤,C组7只成瘤,D组8只成瘤,在肿瘤注射过程中每组各有一只死亡.总体成瘤率53％.X线可见C、D组出现比较明显的溶骨性破坏,骨皮质可见明显的溶断.显微CT可见C、D两组胫骨平台层面出现明显的骨缺损与骨破坏,其影像学表现符合肿瘤性骨损伤的改变.C、D组的肿瘤出现腹腔脏器转移.4组平均生存时间分别为A组在实验结束时没有死亡,B组80.4d,C组65.7d和D组40.2d,差异有显著性意义(P＜0.05).D组的小鼠体重降低明显,与A、B、C组比较,差异有显著性意义(P＜0.05).C、D组BMD下降无显著性差异,与A、B组相比,差异性显著(P＜0.05).病理可见溶骨病变为主的混合性骨质破坏,破骨细胞数量和活性增加.rn 结论：中等剂量免疫抑制剂在制备小鼠肺癌骨转移模型中具有比较理想的效果,小鼠的生存期较长,且成瘤率较高.人肺腺癌A549细胞接种于具有正常免疫功能的小鼠体内,具有与人肺癌肿瘤的组织学形态及生物学行为相似的特点.建立了比较成熟的人肺腺癌细胞移植瘤模型制备方法,为转移瘤的研究和治疗提供动物模型.