重组人EPO N-联糖基化和O-联糖基化的全面表征

摘要

目的:为EPO分析建立两种简易的基于LC的互补方法,分别用于获取N-糖基化和O-糖基化的相关信息.rn 方法:借助采用新型糖基标记试剂RapiFluor-MS的样品制备新策略,快速释放rhEPO中的N-糖基,对其进行GlycoWorksRapiFluor-MS标记,得到rhEPO的N-糖谱图,然后利用灵敏的荧光检测和质谱检测技术进行亲水作用色谱(HILIC)分析.接下来的平行分析中,利用完整蛋白质的HILIC分析甄别糖基释放的rhEPO,以解析O糖基化的相关信息.rn 结果:笔者没有采用分析rhEPO游离O-糖的策略,而是开发了另一种表征策略工作流程,首先使用GlycoWorks Rapid PNGase F和1％RapiGestTM SF表面活性剂对rhEPO进行快速糖基释放,10分钟后获得了一份经N-糖基释放的完整rhEPO样品,然后采用ACQUITY UPLC Glycoprotein BEH Amide糖蛋白分析专用柱通过HILIC分离对其进行分析.rn 结论:重组人促红细胞生成素(rhEPO)分子此前由于其糖基化结构相对复杂,一直被视为糖基化表征的难题,本文介绍的两种简易策略可用于详细研究rhEPO的N-联糖基化和O-联糖基化;充分利用这些工具有助于加快新型生物仿制药的开发.