运用高效液相色谱法快速测定甘精胰岛素的浓度

摘要

目的：甘精胰岛素是胰岛素B链羧基末端增加了两个精氨酸,同时也把A链羧基末端A21位置的天冬酰胺替换成甘氨酸,这使甘精胰岛素在酸性溶液(pH值为4)中完全溶解,在中性溶液中溶解度很低.查阅中国药典中胰岛素鉴别或含量测定时间约70min,所需时间较长,成本较大.本试验旨在寻找一种简单、准确、稳定的液相色谱法准确地测定制剂中甘精胰岛素的浓度,并尝试运用超高效液相色谱仪更快速地进行甘精胰岛素的检测,提高工作效率和节约成本.rn 方法：首先在原有液相方法上进行优化，流动相：（磷酸缓冲盐（PH为3.4）：乙腈：0.4mol/L氯化钾溶液）=18.5:31.5:50；色谱柱：Phenomenex LunaC18(2)100A 5μm4.6×150mm;进样体积：20μL;进样时间：4.5min(其中保留时间：约2.6min)；波长：220nm；柱温：36℃；流速：1.OmL/min；进样盘温度：4℃；稀释剂：O.O9%盐酸溶液。然后对新方法进行方法学验证，考察系统适应性、特异性、准确度、定量下限、残留、线性及范围、稳定性等指标。最后在超高效液相色谱仪上进行方法转换，并考察该方法能否通过方法验证。rn 结果：新方法的系统适用性保留时间和峰面积相对标准偏差<5%，拖尾因子均在0.8到1.5之间；空白稀释剂和空白溶剂在甘精胰岛素注射液保留时间处均无色谱峰出现，且无任何残留；制剂中甘精胰岛素的实测浓度准确度均在±lO%范围内；定量下限可以达到5μg/mL，且信噪比在302-840范围内；在5μg/mL到80μg/mL的浓度范围内，标准曲线的相关系数R>O.999，各浓度点的偏差均在±l0%范围内；样品在进样盘中放置1天内稳定性良好，所有检测结果均符合方法学验证的要求。rn 结论：在普通液相色谱仪上，新方法大大缩短了样品检测时间，并可以测定浓度较低的样品。而超高效液相色谱仪上还未发现一种稳定、准确、快速的方法来进行甘精胰岛素的浓度。