可控裂解的产过氧化氢酶基因工程菌的构建

摘要

通过PCR方法定点诱变并扩增得到温度敏感的T4噬菌体溶菌酶基因ets,与表达载体pUC19连接后转化E. coli JM109,得到重组菌株E. coli JM109(pUC19-ets).重组菌在三角瓶中通过添加IPTG诱导后,悬浮于裂解缓冲液buffer TE中,菌体在10min内吸光度由1.75迅速下降到0.25左右,成功实现了可控裂解.将带有SD序列的T4噬菌体溶菌酶基因ets插入pBV-perA质粒perA基因下游上,重组质粒pBV220-perA-ets转化E.coli JM109,得到可控裂解的产过氧化氢酶基因工程菌.该重组菌在升温诱导条件下,实现了过氧化氢酶基因和溶菌酶基因的共表达,发酵后成功实现了细胞的可控裂解.