铜绿假单胞菌对碳青霉烯类抗生素的耐药表型与外排泵表达水平的关系

摘要

目的:了解在铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,Pa)临床菌株外排泵抑制剂对碳青霉烯类抗生素活性的影响;探索铜绿假单胞菌对亚胺培南和美罗培南耐药性差异与其外排泵表达水平关系. 方法:对亚胺培南耐药的Pa采用琼脂对倍稀释法进行外排泵抑制剂Carbonyl cyanide m-chlorophenylhydrazone(CCCP)(107株Pa)与Phe-Arg-β-naphthylamide(PAβN)(71株Pa)的抑制试验,观察亚胺培南和美罗培南的最低抑菌浓度(MIC)变化;对筛选出来的32株对亚胺培南和美罗培南不同耐药表型的Pa,采用实时荧光定量PCR法,检测三种外排泵基因(mexA、mexD、mexF)的表达量. 结果:联合外排泵抑制剂后,亚胺培南、美罗培南耐药率下降均不明显,没有统计学意义.MIC值没有变化的菌株占50％以上.仅仅8株MIC值降至原MIC值的1/4.设定铜绿假单胞菌ATCC27853外排泵表达量为1,4株敏感株mexA表达量介于0.0003～0.99,mexD表达量介于0.0001～1.11,mexF表达量介于0.013～0.31;10株IMP耐药、MEP敏感株mexA表达量介于0.28～4.48,mexD表达量介于0.37～20.06,mexF表达量介于0.44～5.56;17株IMP、MEP均耐药株mexA表达量介于1.42～138.25,mexD表达量介于0.1～16.66,mexF表达量介于0.22～12.61.在27株耐碳青霉烯类抗生素的Pa菌株中88.89％菌株存在外排泵高表达.统计结果显示:三种外排泵基因表达水平在敏感组与耐碳青霉烯类组之间P＜0.05,耐碳青霉烯类组高于敏感组. 结论:当外排泵抑制剂CCCP和PAβN浓度分别5 μg/ml和20 μg/ml时,在Pa中对碳青霉烯类抗生素的抗菌活性影响较小,外排泵表达水平和泵抑制剂对MIC影响没有明显的相关性.外排泵高表达是本院Pa对碳青霉烯类抗生素耐药的主要原因.一株菌同时存在多种外排泵高表达的现象十分常见.MexAB-OprM的高表达在亚胺培南、美罗培南耐药性差异上发挥重要作用.MexCD-OprJ、MexEF-OprN在Pa对碳青霉烯类抗生素耐药中起重要作用,但是在对亚胺培南、美罗培南耐药性差异上不起主要作用.