人真皮淋巴管内皮细胞分离及冷冻保存技术

摘要

目的：建立分离培养人真皮淋巴管内皮细胞(LEC)及冷冻保存技术,为淋巴管内皮细胞相关研究提供方便. 方法：采用中性蛋白酶及胶原酶消化结合免疫磁珠方法分选LEC,所获内皮细胞体外培养,经免疫荧光染色、RT-PCR及流式细胞仪鉴定分析；采用梯度降温法,冻存内皮细胞,经复苏后,进行形态学检查,以台酚蓝试验、四氮唑盐(MTT)试验、流式细胞术细胞检测等方法鉴定细胞生物特性。 结果：中性蛋白酶及胶原酶消化方法结合免疫磁珠分选可从真皮组织获取高纯度的LEC；与新鲜细胞相比,复苏的内皮细胞活力保持在92％以上；复苏后的内皮细胞形态学、生物学特性及生长曲线与新鲜细胞差异无统计学意义。冻存内皮细胞的凋亡率较新鲜内皮细胞高,但无统计学差异。 结论：中性蛋白酶及胶原酶消化结合免疫磁珠分选可获取足够数量及纯度的LEC.冻存的内皮细胞复苏后无明显形态学改变,并保持较高的活力及体外增殖能力,可作为种子细胞来源,为淋巴管系统发育和新生研究提供方便.