化学合成siRNA对小鼠树突状细胞CD80／CD86及其体外刺激T细胞免疫反应的影响

摘要

目的 观察化学合成siRNA能否有效抑制小鼠树突状细胞CD80和CD86的表达，及其在体外刺激T细胞免疫反应的影响。方法 体外分离和培养小鼠骨髓源性树突状细胞，化学合成siRNA在LipofectAMINE2000介导下转染树突状细胞，通过荧光显微镜和流式细胞仪检测转染效率，应用实时定量RT-PCR和流式细胞仪检测CD80/CD86 mRNA和蛋白的表达情况，并观察转染细胞对同种T淋巴细胞增殖反应的刺激能力。结果 siRNA转染效率为71.86﹪。在三个针对CD80和三个针对CD86的siRNA中，CD80-1抑制CD80表达最为显著，CD86-3抑制CD86表达最为显著。共转染siRNA进一步降低CD80/CD86 mRNA和蛋白的表达，CD80的表达为未处理组的31.05﹪±2．41﹪(P<0.05)，CD86的表达为未处理组的25.43﹪±0.85﹪(P<0.05)，且不受树突状细胞激活因子的影响。混合淋巴细胞反应显示，共转染树突状细胞可诱导刺激同种异体T淋巴细胞低反应性。结论 siRNA能在小鼠骨髓源性树突状细胞内启动RNA干扰作用，并能特异有效地阻断CD80和CD86基因的表达。这种方法不仅可以用于研究各个共刺激分子，也为抗移植物排斥提供了新的治疗手段。