2型猪链球菌烯醇化酶基因的克隆、表达及表达产物的初步鉴定

摘要

对新近测定的S. suis2 05ZYtH33全基囚序列进行生物信息学分析,并与相关家族蛋白进行同源性比较,自行设计合成引物,PCR法扩增出约1.3kb的烯醇化酶编码基因(enolase, eno),将其克隆入pMD-18T载体中,进一步亚克隆入表达载体pET32a。将重组表达质粒pET32a::eno转化E. coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达后,SDS-PAGE初步检测到分了量约为75KD的蛋白带。通过His-Tag亲和层析纯化,获得融合蛋白His-ENO。Western-blot表明该表达产物具有免疫原性。基于ELISA进行的细胞定位实验证实了Enolase可以部分存在猪链球菌2型05ZYH33细菌的表面。这提示了Enolase作为一种新发现的抗原对于引发猪链球菌相关疾病可能发挥着重要的作用。