“恐伤肾”实验深入及筛选的基因分析

摘要

目的：采用抑制消减杂交法(SSH)筛选“恐伤肾”的差异表达基因，发现与应激肾虚相关的一组表达基因，以拓展肾虚证的分子生物学研究广度。方法：结合使用“猫吓鼠”与“反吊荡水”两种方法，造“恐伤肾”应激肾虚的动物摸型。建模前后眼底静脉丛采血，提取总RNA，用SMLART技术逆转录并扩增总cDNA。再应用抑制消减杂交法(SSH)筛选差异表达基因，选择性的扩增目标cDNA片段，同时抑制非目标片段扩增。结果：通过高纯度的RNA获得和总cDNA的合成，进而取得了惊恐应激致肾虚的10个差异基因图谱，图谱中补肾治疗组更接近对照组，优于惊恐肾虚组。在这10个差异基因图谱中，回收测序的第一批有β血红蛋白基因(HBB)、α血红蛋白基因(HBA)、苯丙氨酸一tRNA、缬氨酸一tRNA、亮氨酸一tRNA基因及12s rRNA、16s rRNA基因等7个基因表达谱。结论：通过SSH新发现的7个惊恐应激功能基因(即与肾虚相关的表达基因)，与从OMIM中检索到的与恐惧相关基因有所不同，这为深入研究肾虚证提出了新的问题。SSH结合基因芯片技术，可望对中医肾虚证复杂分子机理进行探索的提供良好前景。