一对用于BTV群NS1基因通用检测的独特引物

摘要

目前蓝舌病病毒(BTV)已发现25个血清型。对BTV进行快速、可靠的群特异性检测极为重要,因此本研究设计了适用于BTV群特异性检测的一对独特引物,并进行了评价。利用DNAstar软件对不同血清型BTV保守基因VP7及NS1分别进行序列比对,发现NS1基因的5'端为最保守片段,针对BTV保守基因的保守片段设计了一对通用型引物。Blast软件分析引物与GenBank发表的病毒基因的同源性,显示引物特异性较好;利用8个不同血清型BTV标准毒株进行RT-PCR检测,证实该引物能有效检测不同血清型BTV;通过BTV1-12和EHDV1-4进行检测,证实该引物具有较好的检测特异性;通过制备的含特检序列的质粒标准品P121进行检测,显示该引物检测的敏感性为10<'5>copies,重复检测CV﹪为0;对模拟血清样品进行检测,结果均为阳性。所设计的特异性引物可用于不同血清型BTV NS1基因的通用型检测。