犬瘟热病毒南京分离株核蛋白基因的克隆与表达

摘要

以犬瘟热病毒南京分离株(CDV-NJ15)为模板,设计两对引物,分段扩增得到了N基因上下游的981bp和702bp两个片段,将其分别T-A克隆到pMD 18-T载体后,再亚克隆到原核表达载体pET-32a(+)中,然后将重组质粒转化进宿主菌BL21中,在37℃ 1mM IPTG诱导下两个片段均获得良好的表达。经SDS-PAGE鉴定,其表达的融合蛋白约56.1kD和44.8kD,与预期值一致。免疫转印试验显示,两个重组蛋白均可被CDV Onderstepoort株兔抗血清识别,表明该重组蛋白具备天然N蛋白的部分抗原性。为探索更为敏感的诊断方法和研制CDV新型疫苗创造条件。