表达猪瘟兔化疫苗株E0蛋白的PK-15细胞系构建

摘要

将克隆到pGEM T-easy载体中的E0基因双酶切回收后，连接到增强型绿色荧光蛋白(EGFP)中，利用LipofectamineTM2000将重组子转染PK-15、BHK-21、VERO三种细胞，直接在荧光显微镜下用蓝光激发进行观察，在三种细胞中都可以观察到绿色荧光，而且在转染后的24h，48 h，72 h三个时间点上，观察到的荧光细胞数量逐渐增多，在72h时荧光细胞的数量在三种细胞中都达到最多，总的来看，在PK-15中荧光细胞的数量最多。通过对细胞荧光的定位发现，重组质粒的荧光主要分布在胞浆内，而且细胞核周围的荧光较强，胞核与胞浆的界限明显，尤其是在PK-15细胞和VERO细胞中这种现象尤为明显。未携带E0目的DNA的pEGFP-N1 Vector转染三种细胞后，都可以观察到绿色荧光，但是整个细胞中是均匀出现荧光的。rn 经酶切、PCR、单抗间接免疫荧光检测，PK-E0细胞中有大量的HCLV的E0的表达，单纯的PK-15细胞中没有E0的表达。rn HCLV株在PK-E0细胞中从48h开始到72h的滴度比在PK-15细胞中的滴度要高。证明PK-E0细胞中的E0蛋白的大量表达增加了HCLV在细胞中的复制。