根癌农杆菌介导的淡紫拟青霉遗传转化

摘要

利用根癌农杆菌介导的转化方法,以淡紫拟青霉的分生孢子为受体,具有抗草甘膦铵盐(GPT)类除草剂的bar基因为筛选标记的双元表达载体pTBar,成功实现了重要的生防真菌淡紫拟青霉的遗传转化。在诱导培养基pH5.8,乙酰丁香酮200ug/mL,共培养时间14h等适宜条件下,转化率可达80~200个转化子/10<'6>cfu。对转化子进行PCR检测表明T-DNA已整合到淡紫拟青霉的基因组中,且转化子的遗传表现稳定。农杆菌介导淡紫拟青霉转化体系的建立,为进一步构建大容量的T-DNA插入突变体库,致病性突变体筛选,从而为致病性相关基因的克隆及功能研究奠定了基础。