水牛Ghrelin基因的克隆与序列分析

摘要

根据Gene Bank中公布的牛、人等物种的Ghrelin核苷酸序列设计合成一对引物，以水牛皱胃组织总RNA为模板，采用RT-PCR法，扩增出Ghrelin成熟蛋白编码cDNA序列，将此扩增产物克隆入pMD18-T载体，进行PCR.双酶切鉴定及序列测定与分析。结果表明，扩增的水牛Ghrelin基因编码序列长为351bp，编码116个氨基酸。同源性分析表明，水牛Ghrelin基因成熟蛋白编码cDNA与牛、人、猪、小鼠、及绵羊基因相应序列的同源性分别为97％、79％、81％、75％、和95％，氨基酸同源性为与牛96％，羊94％，人73％，猪76％和小鼠75％，说明Ghrelin是一组在进化上高度保守的蛋白质。水牛Ghrelin成熟蛋白cDNA的成功克隆，为进一步研究水牛Ghrelin基因全结构.基因表达与调控奠定了基础。