化学限定培养基对猪卵母细胞体外成熟与激活或克隆后胚胎发育的影响

摘要

猪卵母细胞成熟和胚胎培养系统的优化，比如在培养基中添加生长因子，细胞因子以及影响卵母细胞成熟和胚胎植入前发育的一些激素等，均有助于获得优质的卵母细胞和胚胎，满足农业、医学与基础研究的大量需求。在本研究中，我们首先探讨了PZM4对完整卵丘卵母细胞复合体(COCs)核成熟的影响与孤雌激活后的发育能力，其次研究了PZM4对体细胞克隆胚体外发育的影响。研究所获数据用卡方和t检验进行统计分析。实验一，对照组是将屠宰场初情期前母猪的COCs培养于无BSA的NCSU23中，添加10 IUP/ml eCG，10 IU/ml hcG，10ng/ml表皮生长因子与10％猪卵泡液;处理组则用PZM4取代NCSU23作为基础培养基，不添加猪卵泡液，其余成分同对照组。COCs是在39℃，5％CO2，100％湿度下培养40-44小时，然后通过有无第一极体来判断核成熟与否。挑出各组中排出第一极体的卵母细胞，利用电刺激(2.0kV/cm，30 μs直流电)进行孤雌激活。结果在两组成熟体系中，NCSU23组卵母细胞核成熟率高于PZM4组(88.6％vs 74.2％;p＜0.05)，孤雌激活胚卵裂率无显著差异(60.4％vs 50.9％，p＞0.05);NCSU23纽成熟卵母细胞孤雌后的囊胚发育率显著高于PZM4组(23.4％vs 11.4％，p＜0.05)，但囊胚总细胞数没有差异。实验二，用体外成熟卵母细胞作受体，胎儿耳皮肤成纤维细胞作供体进行体细胞核移植。重构克隆胚分别培养于PZM4，PZM3(PZM+3□/ml BSA)或PZM5(PZM+5％胎牛血清)中。结果显示三种培养基培养的克隆胚卵裂率(70.1％vs 82.7％vs 80.2％，p＞0.05)和囊胚率(19.3％vs 26.8％vs 30.8％，p＞0.05)相似，囊胚细胞数也无差异。我们的研究结果表明：化学限定的PZM4可以支持卵母细胞体外成熟，电激活后发育到囊胚阶段。而且猪的体细胞克隆胚在化学限定的PZM4中与在添加BSA的PZM3以及添加血清的PZM5中的体外发育能力上没有差异性。利用该化学限定培养基有助于研究早期猪胚胎培养基中添加成分的确切作用及其机制。