多重PCR检测猪流感病毒及血清亚型的研究

摘要

下载Genebank登录的猪流感病毒各血清亚型NP基因模板，H1、H3亚型HA序列，N1、N2亚型NA序列，经DNAstar软件类比选择保守区设计引物，sPCR筛选出引物对，用于扩增猪流感病毒NP基因、血凝素H1/H3亚型、神经氨酸酶N1/N2亚型基因片段。根据NP、H1N1、H3N2亚型引物扩增片段大小不同，反应条件的差异，将各引物配比组合，形成引物组合，建立多重PCR体系。经对不同亚型模板的扩增、检验，建立的两个多重PCR体系可用于猪流感病毒及H1/H3血凝素亚型、N1/N2神经氨酸酶亚型的快速鉴别、诊断。特异性试验检测多重RT-PCR不能扩增其它猪病毒核酸，核酸的最低检测达2ng。采集临床具有呼吸道症状的猪肺、鼻腔棉试子等85份，与鸡胚分离及血凝，血凝抑制试验比较，阴性样品检测符合率达100％。