狂犬病病毒糖/核蛋白“二价”DNA疫苗安全试验与田间免疫研究

摘要

本研究应用RV糖/核蛋白“二价”DNA疫苗免疫40和301条无狂犬病疫苗免疫史家犬，分别开展安全试验与田间免疫研究。通过观察受试犬的临床表现，监测抗性基因的转移，检测质粒及其主要元件在主要脏器和注射组织的分布、存留及整合与否，观察主要脏器组织病理学变化，分析疫苗对妊娠母犬及其子代的影响，来评价该疫苗的生物安全性。用间接ELISA检测特异性抗体、Western-blot分析抗体组成并测定其中和效价，以评定该疫苗的免疫效果。结果表明：疫苗未经肠道菌群、尿液和唾液排出；抗性基因未发生转移；在心、脾、肾和注射部位未出现组织病理学变化，质粒能分别存留约18、14-18、14和26周以上，但未发生整合；在主要代谢器官肝脏中始终未检测到质粒DNA或其主要元件；机体产生了抗糖蛋白、核蛋白两种特异性抗体；血清稀释8～512倍后，每50μl可以中和100 TCID50狂犬病毒sRV9；稀释8～16倍后每15μl可中和120 MICLD50 CVS，3次免疫后部分血清样品稀释16～32倍后能中和300MICLD50 CVS。说明该DNA疫苗不仅安全性好，而且能够在动物体内诱导良好的体液免疫反应，且诱生的抗体能发挥病毒中和作用。