青霉素结合蛋白变异与肺炎链球菌耐药关系研究

摘要

目的：初步探讨临床分离肺炎链球菌青霉素结合蛋白(PBPs)基因变异与肺炎链球菌耐药关系。rn 方法：分别对15株临床分离的肺炎链球菌进行MIC测定；采用CTAB法提取DNA模板，应用PCR技术进行扩增，对获得的基因扩增产物进行测序。rn 结果：通过对15株临床分离肺炎链球菌的MIC测定，得到青霉素敏感肺炎链球菌(PSSP)4株，青霉素中敏肺炎链球菌(PISP)6株，青霉素耐药肺炎链球菌(PRSP)5株；PCR扩增并测序，获得15株临床分离肺炎链球菌PBPla、PBP2b、PBP2x的全基因序列。PSSP的PBPla、PBP2b和PBP2x氨基酸片段与标准菌株R6高度一致，提示PSSP在PBPs中未发生导致氨基酸替代的点突变；而多数PISP的PBPla、PBP2b和PBP2x也未发生明显变异；PRSP发生的点突变较多，尤以PBPla和/或PBP2x为主，PBPla基因耐药突变中，以S370TMK区域的Thr371→Ala/Ser替代最为多见，PBP2x突变导致靠近S395SN区域的HiS394→Tyr/Leu，S337TMK 区域的Thr3388→Ala/Gly/Pro发生替代。rn 结论：在肺炎链球菌产生耐药的关键青霉素结合蛋白基因的点突变中，常见PBP2b单一位点突变导致较低水平耐药，多见青霉素中敏肺炎链球菌；而以PBPla和/或PBP2x为主的基因突变，则导致高水平耐药，多见青霉素耐药肺炎链球菌。