肺炎链球菌β-内酰胺类抗生素最小抑菌质量浓度与青霉素结合蛋白1A和2B变异的关系

摘要

目的探讨肺炎链球菌(Sp)β-内酰胺类抗生素最小抑菌质量浓度(MIC)与青霉素结合蛋白(PBP)1A和2B变异的关系。方法对55株Sp用E-test法进行7种β-内酰胺类抗生素进行药敏试验,并提取每株Sp的DNA,分别对其青霉素结合蛋白基因(pbp)1a和pbp2b中编码青霉素结合区域(PBD)进行套式PCR扩增和直接测序,并用Clustalx软件进行序列比对,分析PBP1A和PBP2BPBD保守序列的氨基酸置换。结果青霉素敏感株4株中发现PBP2B保守序列SSN后苏氨酸(Thr)445→丙氨酸(Ala),Thr451→Ala和谷氨酸(Glu)481→甘氨酸(Gly)置换,其余6株PSSP未发现PBP1A和PBP2B保守序列氨基酸置换。4株青霉素中介株(PISP)(MIC0.19～0.38mg/L)PBP2BThr445→Ala,Thr451→Ala和Glu481→Gly置换,其中1株发现PBP2B保守序列SVVK后第431-432位点处脯氨酸(Pro)的插入,余3株存在谷氨酰胺(Gln)432→亮氨酸(Leu)置换。另16株PISP(MIC0.5～1.0mg/L)在此基础上出现PBP1ASRN后Pro432→Thr,STMK中Thr371→丝氨酸(Ser)/Ala和KTG附近的短镶嵌序列Thr574→天冬氨酸(ASn)Ser575→Thr,Gln576→Gly,苯丙氨酸(Phe)577→酪氨酸(Tyr)置换,且后二种变异存在于所有青霉素和头孢类中介和耐药株中。20/25株青霉素耐药株存在PBP2B保守序列KTG附近Ala624→Gly,包含Ala624→GlySp组青霉素、头孢呋新、阿莫西林等抗生素平均MIC值明显高于不包含这一置换的Sp组。在青霉素MIC≥0.5mg/L的菌株中均同时存在PBP1A和PBP2B的变异。结论β-内酰胺类抗生素对肺炎链球菌临床分离株MIC值与PBP1A和PBP2B编码青霉素结合活性区域的保守序列中或附近的氨基酸置换有关。