反义策略阻断耐药基因mecA表达逆转MRSA耐药性的研究

摘要

目的 探讨脂质体包裹的靶向耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）耐药基因mecA的硫代寡聚脱氧核苷酸（PS-ODN853）能否有效逆转MRSA对β-内酰胺类抗生素的耐药性。方法 以mecA mRNA为靶点设计合成PS-ODN853；薄膜分散法制备新型的包裹PS-ODN/PEI纳米微粒脂质体；测定纳米微粒和脂质体的平均粒径；紫外法测A260nm值计算脂质体的包封率；平板克隆形成实验计数菌落数（CFU）；微量法测定细菌生长曲线；液体稀释法测定给予PS-ODN853后β-内酰胺类抗生素对MRSA的最小抑菌浓度（MIC）；荧光实时定量PCR法 检测PS-ODN853对mecA表达的影响。结果 PS-ODN/PEI纳米微粒和脂质体的粒径分别为（84.8±21.7）nm和（217.1±78.6）nm，脂质体的平均包封率为79.7% ± 2.69 %。荧光实时定量PCR结果显示脂质体包裹的PS-ODN853能明显抑制mecA的表达，并具有浓度依赖性抑制效应。给予脂质体包裹的PS-ODN853后，苯唑西林明显抑制了MRSA的生长（P<0.01），MRSA的菌落数明显低于对照组（P<0.01），苯唑西林等4种β-内酰胺类抗生素对MRSA的MIC值均显著降低。结论 脂质体包裹的抗mecA的PS-ODN853能够选择性抑制MRSA耐药基因mecA的表达，有效的逆转MRSA对β-内酰胺类抗生素的耐药性，恢复其敏感性。