牛源性无乳链球菌培养特性及生长过程中影响因素的研究

摘要

奶牛乳房炎是对奶牛危害最大，造成损失最严重的一种常见多发病。引起乳房炎的病原微生物多达150多种，但最常见的约有20多种，其中主要以无乳链球菌为主，其次是停乳链球菌、乳房链球菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌等，因无乳链球菌引起的奶牛乳房炎发病率高达20％～40％。可见，无乳链球菌在引起奶牛乳房炎的病原菌中占有非常重要的地位。无乳链球菌，又称B群链球菌(GBS)。不仅是引起奶牛乳房炎的主要病原菌，在人上也是引起新生儿和妊娠妇女发病及死亡的最重要感染性病原体。 本项研究，以无乳链球菌地方菌株(2101)为试验菌株，通过对Columbia肉汤(CB)，Todd－Hewitt肉汤(THB)、改良的限制性化学培养基(改良的CDM)和自制的优化肉汤(WYH)四种液体培养基摇瓶培养试验，结果表明，THB不适合无乳链球菌生长，无乳链球菌在WYH和Columbia肉汤中长势良好，但在WYH肉汤中无乳链球菌生长延迟期大大缩短，培养4h就开始进入对数生长期;而在Columbia肉汤中培养12h后才能进入对数生长期。因此我们选择(WYH)作为其发酵培养基。通过对无乳链球菌生长过程中各种因素的影响研究，结果表明，溶氧量对无乳链球菌的生长无影响。而接种量对无乳链球菌生长有明显的影响，接种量过低，无乳链球菌生长太慢，接种量过高则培养基营养不足，菌体容易衰老，其最佳接种浓度为1.6～2亿/L。培养基的初始PH值对无乳链球菌生长有明显影响，最适生长的PH范围为7～8。在生长过程中于培养的3～5h内，补加NaOH调节PH，可以有效促进无乳链球菌的生长。在(WYH)肉汤中添加葡萄糖试验，结果表明，初始最适葡萄糖含量为15g/L为最佳，在生长过程中的第4～6h内补加10g，L的葡萄糖，可使细菌浓度显著增加。结论：无乳链球菌的最佳液体培养基为(WYH)。无乳链球菌在生长过程中，溶氧量对其生长无影响，而种子菌接种量、培养基的PH值和葡萄糖的含量对其生长有显著的影响。无乳链球菌在生长过程中，只有在对数生长期(3～6h内)，补加营养成分(NaOH及葡萄糖)，能适当延长无乳链球菌的对数生长期，可较大程度提高无乳链球菌收获时的细菌含量。