Ang-1和VEGF165腺病毒的载体构建及其表达

摘要

目的:构建人血管生成素-1(Ang-1)和人血管内皮生长因子VEGF165(VEGF165)的腺病毒载体,为下一步用Ang-1和VEGF165转基因细胞修饰丝素材料进行动物创伤恢复实验研究奠定基础。rn 方法:通过RT-PCR方法克隆人Ang-1全长编码基因,PCR法以pcDNA3.0-VEGF165质粒为模扳扩增VEGF165基因,分别将目的基因酶切连接到带有GFP标记的pTrack-CMV质粒上,构建重组质粒pTrack-CMV-Ang-1和pTrack-CMV-VEGF165,经PCR、酶切和测序鉴定后将其PmeI线性化与腺病毒质粒pAdcasy-1共转化BJ5183细菌,获得重组腺病毒载体pAdcasy-1-pTrack-CMV-Ang-1/VEGF165,经PacI线性化后转染QBI-293A包装细胞,收获腺病毒重组病毒子Ad-Ang-1及Ad-VECF165,ELISA法检测目的基因的表达。rn 结果:测序显示Ang-1和VEGF165序列正确,重组腺病毒载体获得成功包装,病毒效价可达2-5×1010pfu/mL ELISA法检测到了Ang-1、EGF165基因均能在细胞中有效表达。rn 结论:成功构建并获得了Ad-Ang-1及Ad-VEGF165重组病毒子,为今后开展血管形成以及丝素蛋白材科诱导血管形成的分子机制研究创造了条件。