携带入VEGF165的腺病毒载体的构建及鉴定

摘要

目的构建携带人血管内皮生长因子(VEGF)165基因的重组腺病毒载体,用于治疗重症冠心病.方法将人VEGF165 cDNA正向插入到穿梭质粒pHCMVSP1A的CMV启动子之下,构建重组质粒,即pAd-hVEGF165,通过脂质体与pJM17共转染293细胞,经同源重组获得携带人VEGF165基因的重组腺病毒载体Ad-hVEGF165.通过PCR扩增法鉴别Ad-hVEGF165,根据A260nm计算病毒滴度.结果人VEGF165 cDNA成功地正向插入到pHCMVSP1A载体中,以重组病毒基因组DNA为模板,同时扩增出了576 bp的VEGF165 cDNA基因片段和860 bp的腺病毒骨架基因片段,证实了Ad-hVEGF165的正确性.测病毒滴度为1.94×1012 pfu/ml.结论携带人VEGF165的腺病毒载体的成功构建为用VEGF165基因治疗冠心病奠定了基础.