实验动物病原菌的一体化蛋白芯片检测方法

摘要

目的：制备实验动物小鼠需检测病原菌的多组特异性抗原，并制作成蛋白芯片，为建立一体化的实验动物病原微生物检测方法提供基础。rn 方法：通过western blot方法选择病原菌的特异性抗原，并利用SDS-聚丙烯酰胺凝胶回收的方法制备选定的抗原，利用芯片点样仪将回收的抗原按照预先设定的矩阵点在氨基化处理过的玻片上，制备蛋白芯片，芯片先与小鼠阳性血清杂交，再与辣根过氧化物酶标记的羊抗小鼠IgG杂交，DAB显色，通过扫描及-软件分析，获得检测结果。rn 结果：通过对比western blot结果，伤寒沙门氏菌、嗜肺巴氏杆菌、假结核耶尔森菌和念珠状链杆菌每种病原菌选定了五组特异性较好的抗原，凝胶回收制备了选定的所有抗原，制作了蛋白芯片，分别与免疫伤寒沙门氏菌、嗜肺巴氏杆菌、假结核耶尔森菌和念珠状链杆的小鼠阳性血清杂交后，扫描结果显示，芯片上对应抗原均显示了很强的阳性信号，并具有良好的特异性。rn 结论：制备了可以同时检测几种细菌的蛋白芯片，为建立一体化的实验动物病原微生物检测方法提供了基础。