肺炎衣原体Cpn0146基因的克隆表达与定位及其生物信息学分析

摘要

目的：重组表达肺炎衣原体Cpn0146基因，并对表达的内源性蛋白进行细胞内定位，对重组蛋白进行生物信息学分析。rn 方法：使用PCR方法从肺炎衣原体菌株AR39基因组中扩增第0146段开放读码区基因，使用限制性内切酶BamH I/Not I酶切目的片段和载体PGEX-6P2,T4连接酶连接后转化人大肠杆菌感受态XL-Blue,并诱导表达出融合蛋白GST—Cpn0146。融合蛋白免疫小鼠制备抗体后应用直接免疫荧光技术对衣原体感染细胞内Cpn0146基因表达的内源性蛋白进行定位。利用软件Expasy对重组蛋白进行进一步生物信息学分析。rn 结果：克隆出肺炎衣原体基因Cpn0146,全长486bp,编码161个氨基酸；并表达了融合蛋白GST-Cpn0146,分子量约为45kD；制备了抗体，IFA实验发现该蛋白定位于肺炎衣原体包涵体膜上。生物信息学分析对其理化性质和结构有一定了解。rn 结论：肺炎衣原体Cpn0146基因编码蛋白为一包涵体膜蛋白，抗原性和亲水性较好。