猪圆环病毒2型间接ELISA抗体检测方法的建立与初步应用

摘要

本研究利用原核表达的猪圆环病毒2型(PCV-2)Cap蛋白作为标准抗原蛋白建立PCV-2抗体检测方法，同时对建立的检测方法相关条件进行了优化。通过优化确定抗原的最佳包被浓度为10μg/mL，抗血清的最佳稀释度为1：160倍稀释。最佳封闭试剂为10%的牛血清。二抗的使用浓度为1：1000倍稀释。抗血清及二抗的最佳反应条件为37℃条件下孵育60min。底物的最佳反应条件为37℃反应10min。Cutoff值为0.25。通过批内及批间重复性的评价，变异系数均小于0.1，表明本检测方法具有较高的可重复性。与标准的检测试剂盒相比，在检测临床样本中本检测方法与对照试剂盒检测符合率为91.7%。通过结果的分析表明，建立的检测方法可以用于临床PCV-2抗体的检测。