应用外显子扩增和拼接法克隆鸡卵清白蛋白基因(OVA)

摘要

基因的克隆和表达是研究一个基因功能的基础。传统基因克隆方法是利用RT-PCR扩增全长基因。该方法涉及RNA的分离和纯化、反转录反应以及PCR扩增。该方法在克隆高表达基因方面得到成功应用。然而，对于那些些低表达基因或者组织特异表达以及受时空调控表达的基因，传统基因克隆方法的应用受到限制，同时加上RNase酶的影响，增加了这些幕因成功克隆的难度。随着各类动物基因组测序工作的完成，为应用外显子扩增和拼接法克隆基因提供了条件。本研究对原有外显了扩增和拼接法进行了改进，通过将引物设计在相邻外显子连接处，使引物重叠区处于外显子内，即可通过一步重叠PCR克隆获得全长目的基因。应用改进的外显子扩增和拼接法成功从鸡基因组中克隆了鸡卵清白蛋白基因。