Tet-on系统在鸡胚成纤维细胞中诱导表达条件的优化

摘要

Tet-on系统是一种高效无毒、具有严密开/关功能的基因调控系统。脂质体转染法是较为常用的将外源基因转入细胞的方法，在转染过程中，很多因素会影响脂质体的转染效率，为了尽可能提高转染率及外源基因的表达水平，试验中对转染及诱导表达条件进行了优化。结果表明：当pBI-EGFP-EGFP：pCAGGS-rtTA2s-M2为1∶2，质粒DNA：LjpofectemineTM2000为1∶2.5，转染后6h加入Dox终浓度为1μg/mL，诱导12h可获得较为满意的表达水平，转染率可达(32.0±3.1)%。Tet-on系统在鸡胚成纤维细胞中的有效转染及GFP的高效表达，为下一步在CEF中进行外源目的基因的功能研究奠定了良好的基础。